厄洛替尼(erlotinib)(erlotinib)处置的成纤维细胞中的差异基因表达-

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摘要

  针对表皮生长因子受体 (EGFR) 的疗法会导致疼痛性皮疹,这是接受 EGFR 酪氨酸激酶抑制剂 (TKI) 治疗的非小细胞肺癌 (NSCLC) 患者中常见

  针对表皮生长因子受体 (EGFR) 的治疗方法会导致痛苦性皮疹,这是接受 EGFR 酪氨酸激酶抑制剂 (TKI) 医治的非小细胞肺癌 (NSCLC) 患病者中常见且使人衰弱的毒性;然而,很难预测皮疹的发展和严重阶段。研究一种 NSCLC 患病者用来阻止或减缓肿瘤生长的 EGFR TKI厄洛替尼(erlotinib)erlotinib)怎样改变真皮成纤维细胞的转录组。

  方式:

  将真皮成纤维细胞 (ATCC® PCS-201-012™) 接种在细胞培养瓶中,在标准条件下生长,然后转移扩散到细胞培养皿中。用厄洛替尼(erlotinib)(erlotinib) 100nM ( n= 5)、厄洛替尼(erlotinib) 1μM (n= 5)、载体 1μM (DMSO) (n= 5) 或不处置 (n= 5)对细胞进行三天处置。使用标准 TRIzol® 方式提取总 RNA,并使用 Affymetrix GeneChip® Human Genome U133 Plus 2.0 阵列进行杂交。使用稳健多阵列平均法对阵列产生的原始强度进行归一化,并使用 Limma R 软件中的 ANOVA 进行分析。使用 Ingenuity Pathway Analysis 分析差异表达的基因,以识别该数据集中丰富的经典或非经典讯号通路。

  结果:

  我们根据它们在伤口愈合 ( AQP3)、皮疹发展 (CCL2)、成纤维细胞活化 (PALLD)、恶性肿瘤和
厄洛替尼(erlotinib)(erlotinib)处置的成纤维细胞中的差异基因表达-
恶性肿瘤进展 (GDF-15、SLC7A11、MMP12、DIRAS3) 和细胞周期控制中的潜在作用选择基因进行研究。CDC6)。我们可以通过蛋白质印迹分析和 qPCR(MMP12、CCL2、CDC6和SLC7A11)验证其中四个基因。

  靶向 EGFR 的治疗方法已被证明对患有过度表达 EGFR 的肿瘤(例如,NSCLC)的患病者在临床上是有效的,但 EGFR TKI 治疗方法通常会导致痛苦的丘疹脓疱皮疹,这可能会限制长期医治。我们进行了这项微阵列研究,以进一步了解在引入厄洛替尼(erlotinib)(erlotinib)医治后成纤维细胞系中转录组的变化,并确定与 EGFR TKI 相关皮疹机械相关的潜在基因以供进一步研究。在我们选择用于验证的八个基因中,我们可以通过蛋白质印迹分析和 qPCR 确认四个(MMP12、CCL2、CDC6和SLC7A11)。

  在本实验中使用微阵列技术的优势是有机遇观察用厄洛替尼(erlotinib)(erlotinib)处置的真皮成纤维细胞与联合对照(载体或不医治)中人类基因组中几乎所有基因的表达同时发生的变化。然而,微阵列缺乏特异性,因为只能检测阵列上的基因。因此,可能有我们感兴趣的基因的不同亚型在阵列上未检查到。此外,杂交的背景水平(无论表达水平怎样都与探针杂交的基因)也限制了微阵列分析的准确性,特殊是对于低丰度的基因。鉴于此,我们无法验证也就不足为奇了AQP3和PALLD;尽管如此,我们的结果为进一步研究这些基因在经历 EGFR TKI 诱导皮疹的恶性肿瘤患病者中提供了基础。

  我们选择了几个基因进行进一步研究,因为它们在伤口愈合、皮疹发展或成纤维细胞激活中的潜在作用,但这些基因在我们的数据集中没有高度表达。CCL2已被证明在人类皮肤和不同的小鼠模型中显着上调,表明 EGFR TKI 在皮肤中具有抗炎作用。在我们的微阵列研究中,在成纤维细胞系上用 1μM 厄洛替尼(erlotinib)(erlotinib)处置导致CCL2下调,但在新实验中用 qPCR 证实时上调,这与所描述的研究一致。鉴于免疫反应性存在于所有皮肤细胞类别中,但在角质形成细胞中更为突出,有理由认为CCL2在真皮成纤维细胞中的含量可能较低。在检测蛋白质的潜在关联时,字符串分析显示 CCL2 和 CDC6 之间存在某种关联,CDC6 是 DNA 复制初期步骤的调节剂。CDC6与 NSCLC 的鳞状亚型有关,并且与 NSCLC 患病者的总体、无重复发和无病生存期相关,与医治和疾病分期无关。基因的关系及其与 EGFR TKI 诱导的皮疹的互相作用仍然是一个探索领域。

  我们选择验证两个基因,MMP12和SLC7A11,因为它们在恶性肿瘤和恶性肿瘤进展中的作用。MMP12是一种蛋白质编码基因,参与正常生理过程(如组织重塑)中细胞外基质的分解,已被证明在肿瘤侵袭和转移扩散中具有重要作用。虽然我们没有发现专门研究MMP12和 EGFR-TKI 皮疹的已发表研究,但 MMP12已在肝炎状皮炎 (DH) 患病者中进行了检测,并由自发性和诱导性 DH 皮疹的上皮下巨噬细胞表达,并且可能是未来探索 EGFR TKI 引发起的皮疹的目标。

  我们进行了一项微阵列研究,以了解用厄洛替尼(erlotinib)(erlotinib)医治的成纤维细胞中转录组的变化。我们验证了四个基因CCL2、CDC6、SLC7A11和MMP12的表达变化,并且它们是进一步研究的候选者,因为它们在真皮成纤维细胞中 EGFR TKI 相关皮疹的发展和严重阶段中具有潜在作用。【微信:yaodaoyaofang】扫描下方二维码了解更多:

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